Serbuk IPTG (Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside).ialah inducer yang terkenal dan digunakan secara meluas dalam biologi molekul, terutamanya dalam bidang ekspresi protein rekombinan. Dalam blog ini, kita akan mendalami kesan serbuk IPTG terhadap ekspresi protein dengan keterlarutan rendah, sebagai pembekal serbuk IPTG, berkongsi pandangan saintifik dan pengalaman praktikal.
Serbuk Iptg
Kod Produk: BM-2-5-133
Nama: Iptg
Nombor CAS: 367-93-1
MF: C9H18O5S
MW: 238.3
Nombor EINECS: 206-703-0
Pasaran: Indonesia, UK, New Zealand, Kanada dll.
Pengeluar: BLOOM TECH Kilang Guangzhou
Perkhidmatan teknologi: R&D Dept.-4
Penghantaran: Penghantaran sebagai satu lagi nama sebatian kimia yang tidak sensitif.
Kami sediakanSerbuk Iptg, sila rujuk laman web berikut untuk spesifikasi terperinci dan maklumat produk.
produk:https://www.bloomtechz.com/synthetic-chemical/api-researching-only/iptg-powder-cas-367-93-1.html
Memahami Protein dengan Keterlarutan Rendah
Protein dengan keterlarutan rendah merupakan cabaran biasa dalam bidang bioteknologi. Protein ini cenderung untuk membentuk agregat, sama ada dalam sel semasa ekspresi atau semasa proses penulenan. Pengagregatan boleh disebabkan oleh pelbagai faktor, seperti kehadiran kawasan hidrofobik dalam jujukan protein, lipatan yang salah, atau kepekatan protein tempatan yang tinggi. Keterlarutan protein yang rendah boleh menyebabkan pengurangan hasil, kesukaran dalam penulenan, dan berpotensi menjejaskan aktiviti biologi produk akhir.
Bagaimana IPTG Berfungsi dalam Ekspresi Protein
IPTG adalah analog sintetik laktosa. Dalam konteks ekspresi protein, ia digunakan untuk mendorong ekspresi gen di bawah kawalan operon lac. Dalam bakteria seperti E. coli, operon lac ialah satu set gen yang terlibat dalam metabolisme laktosa. Apabila laktosa hadir, ia mengikat kepada penindas lac, menyebabkan perubahan konformasi yang membolehkan RNA polimerase menyalin gen dalam operon. IPTG meniru kesan ini, mengikat kepada penindas lac dan melegakan penindasan, dengan itu memulakan transkripsi gen sasaran dan sintesis protein seterusnya.
Kesan IPTG terhadap Protein Keterlarutan Rendah
Kesan Positif
Peningkatan Tahap Ekspresi
Salah satu faedah utama menggunakan IPTG ialah ia boleh meningkatkan ekspresi protein sasaran dengan ketara. Untuk protein keterlarutan rendah, tahap ekspresi yang lebih tinggi mungkin kelihatan berlawanan dengan intuitif kerana ia berpotensi menyebabkan lebih banyak pengagregatan. Walau bagaimanapun, dalam beberapa kes, peningkatan terkawal dalam ekspresi boleh menyediakan lebih banyak bahan untuk penulenan dan pengoptimuman hiliran. Sebagai contoh, jika protein dinyatakan pada tahap yang sangat rendah, ia mungkin sukar untuk dikesan dan disucikan. Dengan menggunakan IPTG untuk meningkatkan ekspresi, kita boleh memperoleh jumlah protein yang lebih besar, yang kemudiannya boleh tertakluk kepada strategi peningkatan keterlarutan.
Kawalan Ekspresi Ringkas
IPTG membolehkan kawalan tepat ekspresi protein. Kita boleh melaraskan kepekatan IPTG untuk mengawal kadar sintesis protein. Ini penting untuk protein keterlarutan rendah kerana kadar ekspresi yang perlahan dan terkawal mungkin memberi protein lebih masa untuk dilipat dengan betul, mengurangkan kemungkinan pengagregatan. Sebagai contoh, menggunakan kepekatan IPTG yang lebih rendah boleh menghasilkan ekspresi protein yang lebih beransur-ansur, membolehkan jentera lipatan selular untuk bersaing dengan sintesis.
Kesan Negatif
Pengagregatan: Salah satu kelemahan utama menggunakan IPTG untuk protein keterlarutan rendah ialah peningkatan risiko pengagregatan. Apabila IPTG mendorong ekspresi tahap tinggi, sel mungkin tidak dapat mengendalikan sejumlah besar protein yang baru disintesis. Protein mungkin terkumpul dalam sel lebih cepat daripada ia boleh dilipat dengan betul, yang membawa kepada pembentukan badan kemasukan. Badan rangkuman ialah agregat tidak larut protein tersalah lipat, yang boleh menjadi sukar untuk dilarutkan dan dilipat semula ke dalam bentuk aktifnya.
Tekanan Selular: Ekspresi tahap tinggi yang disebabkan oleh IPTG juga boleh menyebabkan tekanan selular. Sel perlu mengalihkan sejumlah besar sumber ke arah sintesis protein, yang boleh menjejaskan proses selular lain. Tekanan ini boleh menyebabkan penurunan daya maju sel dan kualiti protein keseluruhan. Untuk protein keterlarutan rendah, tekanan tambahan boleh memburukkan lagi masalah pengagregatan.
-
Strategi untuk Mengurangkan Kesan Negatif
-
Mengoptimumkan Kepekatan IPTG: Seperti yang dinyatakan sebelum ini, mencari kepekatan IPTG yang optimum adalah penting. Dengan menjalankan eksperimen titrasi, kita boleh menentukan kepekatan IPTG terendah yang masih membenarkan ekspresi protein yang mencukupi. Ini boleh membantu mengurangkan risiko pengagregatan dan tekanan selular. Sebagai contoh, daripada menggunakan IPTG 1 mM yang biasa disyorkan, kita boleh menguji kepekatan antara 0.01 mM hingga 0.5 mM untuk mencari titik manis.
Ungkapan bersama Chaperones: Chaperones ialah protein yang membantu dalam pelipatan protein lain. Pendamping yang mengekspresikan bersama bersama dengan protein keterlarutan rendah sasaran boleh membantu meningkatkan keterlarutannya. Sebagai contoh, GroEL dan GroES adalah pendamping yang boleh diekspresikan bersama dalam E. coli untuk membantu dalam pelipatan protein rekombinan.
Pengoptimuman Suhu: Menurunkan suhu semasa ekspresi protein juga boleh meningkatkan keterlarutan protein keterlarutan rendah. Pada suhu yang lebih rendah, kadar sintesis protein lebih perlahan, memberikan protein lebih masa untuk dilipat dengan betul. Sebagai contoh, menyatakan protein pada 16°C dan bukannya standard 37°C boleh mengurangkan pengagregatan dengan ketara.
-
Produk Berkaitan untuk Penyelidikan
Jika anda terlibat dalam penyelidikan protein, anda mungkin juga berminat dengan beberapa produk lain.Serbuk Acriflavineadalah bahan kimia sintetik yang telah digunakan dalam pelbagai aplikasi penyelidikan. Ia boleh digunakan dalam kajian yang berkaitan dengan pewarnaan sel dan sebagai agen antibakteria.Serbuk Aniracetamadalah satu lagi produk yang telah dikaji untuk potensi kesan peningkatan kognitifnya. Ia boleh digunakan dalam penyelidikan neurosains.Serbuk Luteolin CAS 491 - 70 - 3adalah flavonoid yang mempunyai sifat antioksidan dan anti-radang serta boleh digunakan dalam penyelidikan biokimia dan farmakologi.
Kesimpulan dan Seruan Bertindak
Kesimpulannya, serbuk IPTG mempunyai kesan positif dan negatif terhadap ekspresi protein dengan keterlarutan yang rendah. Walaupun ia boleh meningkatkan tahap ekspresi dan menyediakan lebih banyak bahan untuk penyelidikan, ia juga menimbulkan risiko pengagregatan dan tekanan selular. Dengan mengoptimumkan kepekatan IPTG dengan teliti, mengekspresikan pendamping bersama, dan melaraskan suhu ungkapan, kita boleh mengurangkan kesan negatif ini.
Sebagai pembekal serbuk IPTG, kami komited untuk menyediakan produk berkualiti tinggi untuk menyokong penyelidikan anda. Jika anda berminat untuk membeli serbuk IPTG atau mempunyai sebarang pertanyaan tentang penggunaannya dalam ekspresi protein, sila hubungi kami untuk perbincangan dan perolehan lanjut. Kami berharap dapat bekerjasama dengan anda untuk mencapai matlamat penyelidikan anda.
Rujukan
Pengkaji, FW (2005). Pengeluaran protein secara auto aruhan dalam budaya goncang berketumpatan tinggi. Ekspresi dan Pemurnian Protein, 41(1), 207 - 234.
De Marco, A. (2009). Mengatasi cabaran ekspresi protein rekombinan dalam Escherichia coli: kajian semula kemajuan terkini dalam ekspresi bersama pendamping molekul. Kilang Sel Mikrob, 8(1), 26.
Baneyx, F., & Mujacic, M. (2004). Lipatan protein rekombinan dan salah lipatan dalam Escherichia coli. Bioteknologi Alam Semula Jadi, 22(11), 1399 - 1408.