Sephadex G75adalah sejenis pengisi penapis gel dengan prestasi yang baik. Ia disediakan oleh silang silang dextran dan epichlorohydrin. Ia adalah gel berbentuk manik dengan sejumlah besar kumpulan hidroksil, yang mudah membengkak dalam penyelesaian air dan elektrolit. Had pengecualian maksimum sebatian ini adalah 80000, dan ijazah pembengkakan tertentu bergantung kepada jumlah resin kering dan keadaan operasi. Sebagai contoh, dalam keadaan tertentu, tahap pembengkakan resin kering mungkin 519ml/g. Apabila julat pH operasi adalah 6.210 (5.210 untuk sesetengah produk), sebatian boleh kekal stabil. Adalah disyorkan untuk menyimpannya pada suhu bilik, sejuk, dan jauh dari cahaya dalam julat suhu 430 darjah (atau 425 darjah) untuk mengekalkan prestasi dan kestabilannya. Bahan ini sangat sesuai untuk biomolekul besar dengan berat molekul lebih besar daripada 80000. Terutamanya digunakan untuk penggantian penyahgaraman dan penampan biomolekul besar seperti itu. Melalui satu - operasi langkah, adalah mungkin untuk cepat menghilangkan, mengeluarkan bahan pencemar, dan memindahkan molekul ke penyelesaian penampan baru. Sebagai tambahan kepada penggantian penyahgaraman dan penampan, Sephadex G-75 juga sesuai untuk proses pemurnian biomolekul besar.
 |
 |
Sephadex G75adalah gel dextran, yang digunakan terutamanya untuk teknologi pemisahan dan pemurnian dalam biokimia dan biologi molekul. Penggunaan utama bahan ini adalah seperti berikut:
Dalam proses penyahgaraman, ia secara berkesan dapat mengeluarkan garam (biasanya garam tak organik molekul kecil) dari penyelesaian molekul biologi. Kelebihan bahan ini adalah mudah untuk beroperasi, cepat, dan dapat mencapai penyahgaraman yang berkesan tanpa mengubah aktiviti biomolekul. Di samping itu, disebabkan oleh kestabilan kimia yang sangat baik dan biokompatibiliti, ia sesuai untuk rawatan penyahgaraman pelbagai biomolekul, termasuk protein, peptida, asid nukleik, dan lain -lain.
Bahan ini mempunyai pelbagai aplikasi dalam penggantian penampan, terutamanya dalam bidang biokimia dan biologi molekul. Sebagai contoh, dalam proses pemurnian protein, kadang -kadang perlu untuk memindahkan protein dari satu sistem penampan ke sistem penampan lain yang lebih sesuai untuk kestabilan dan aktiviti mereka. Dan bahan ini dapat mencapai matlamat ini dengan berkesan; Dalam proses pengekstrakan asid nukleik, ia juga perlu untuk memisahkan asid nukleik dari larutan yang mengandungi kekotoran dan garam, dan memindahkannya ke penampan baru untuk operasi berikutnya. Ia juga terpakai kepada senario ini; Semasa budaya sel, kadang -kadang perlu untuk menggantikan medium budaya atau penampan untuk mengekalkan pertumbuhan dan aktiviti sel. Ia boleh digunakan untuk menghilangkan bahan berbahaya dari media kultur lama atau buffer dan memperkenalkan media kebudayaan baru atau buffer.
Sieving molekul
Dalam proses penyelidikan dan penyediaan protein, biasanya diperlukan untuk memisahkan protein sasaran dari campuran kompleks. Ia boleh memisahkan protein berdasarkan saiz mereka, dengan itu mencapai pemurnian protein. Dengan menyesuaikan keadaan elusi, seperti kekuatan ion dan nilai pH eluen, kecekapan pemisahan protein dapat dioptimumkan lagi. Sebagai tambahan kepada protein dan asid nukleik, ia juga boleh digunakan untuk pemisahan dan pemurnian biomolekul lain, seperti polysaccharides, enzim, antibodi, dan lain -lain. Kelajuan pergerakan biomacromolecules dalam gel bergantung pada saiz dan bentuk mereka, untuk mencapai pemisahan yang berkesan. Walaupun bahan ini tidak digunakan secara langsung sebagai alat untuk penentuan berat molekul, ia boleh berfungsi sebagai alat tambahan dalam penentuan berat molekul.
Dalam proses pemurnian protein, biasanya perlu menghilangkan kekotoran molekul kecil seperti garam, metabolit molekul kecil, ligan yang tidak terikat, dan lain -lain dari larutan protein. Bahan ini secara berkesan dapat menghapuskan kekotoran molekul kecil ini dari penyelesaian protein, dengan itu meningkatkan kesucian protein. Kesan penapis molekulnya membolehkan kekotoran molekul kecil ini dikeluarkan dengan berkesan, mengakibatkan asid nukleik yang lebih murni. Persiapan enzim biasanya mengandungi kekotoran molekul kecil seperti substrat yang tidak bereaksi, inhibitor, metabolit, dan lain -lain. Kekotoran ini boleh menjejaskan aktiviti dan kestabilan enzim. Melalui penapisan gel bahan, kekotoran molekul kecil ini dapat dikeluarkan dengan berkesan dan kesucian penyediaan enzim dapat diperbaiki. Selain protein dan asid nukleat,
Mensimulasikan transduksi isyarat intercellular
Transduksi isyarat sel Inter adalah mekanisme pengawalseliaan teras aktiviti kehidupan, yang melibatkan proses kompleks seperti pengiktirafan sel, penukaran isyarat, dan tindak balas fisiologi. Penyelidikan tradisional sering bergantung kepada model sel hidup, tetapi terdapat batasan seperti rangkaian isyarat kompleks dan pelbagai faktor mengganggu.Sephadex G75adalah medium penapisan gel dextran klasik. Struktur berliang dan kesan penapis molekulnya memberikan model fizikal yang unik untuk mensimulasikan transduksi isyarat intercellular.
Model fizikal untuk mensimulasikan transduksi isyarat intercellular menggunakan Sephadex G-75
Simulasi persimpangan jurang antara sel
Persimpangan Gap adalah saluran hidrofilik yang dibentuk di antara sel -sel bersebelahan melalui penghubung, yang membolehkan pertukaran molekul kecil dengan berat molekul<1500 Da. The pore size range of Sephadex G-75 (40-300 μ m) is much larger than that of intercellular junctions (about 1.5 nm), but its porous structure can simulate molecular diffusion processes in local microenvironments. For example:
Pembentukan kecerunan molekul isyarat: kepekatan molekul isyarat yang berbeza (seperti CAMP, CA ²+) dimuatkan ke dalam lajur gel. Perbezaan kadar penyebaran molekul kecil dalam liang gel dapat dilihat melalui kesan penapis molekul, dan penghantaran kecerunan isyarat kimia antara sel boleh disimulasikan.
Simulasi tindak balas sinergistik: Dua molekul berinteraksi (seperti ligan dan reseptor) dimuatkan pada kedua -dua hujung lajur gel masing -masing, dan kinetik mengikat mereka dianalisis melalui perbezaan masa elusi untuk mensimulasikan proses pengiktirafan molekul dalam komunikasi hubungan langsung antara sel.
Simulasi hubungan molekul pada permukaan membran
Komunikasi antara molekul permukaan membran bergantung pada interaksi spesifik protein permukaan membran sel. Sephadex G-75 boleh mensimulasikan proses ini melalui pengubahsuaian fungsi:
Eksperimen mengikat ligan reseptor: protein reseptor biotinilasi (seperti EGFR) ditetapkan pada permukaan zarah gel, ligan berlabel pendarfluor (seperti EGF) ditangkap melalui sistem biotin streptavidin.
Analisis mengikat yang kompetitif: Preload Kompleks ligan reseptor dalam lajur gel, menambah inhibitor kompetitif kepekatan yang berbeza (seperti antibodi anti EGFR), mengira pemalar perencatan (KI) melalui peralihan puncak elusi, dan mensimulasikan kesan intervensi ubat pada laluan isyarat sel.
Simulasi penghantaran isyarat kimia
Transduksi isyarat kimia bergantung pada penyebaran molekul isyarat kimia (seperti hormon dan sitokin) yang dirembes oleh sel melalui cecair badan atau matriks ekstraselular untuk menargetkan sel. Sephadex G - 75 boleh membina model penyebaran tiga dimensi:
Simulasi Sistem Paracrine: Sel -sel rahsia (seperti makrofaj) dan sel sasaran (seperti sel T) masing -masing dikemas dalam mikrosfera gel, dan status pengaktifan sel sasaran (seperti ekspresi CD69) diperhatikan melalui budaya CO untuk mensimulasikan kesan tempatan isyarat parakrin.
Penghantaran isyarat endokrin: Hormon berlabel pendarfluor (seperti insulin) dimuatkan ke dalam lajur gel, dan interaksi mereka dengan liang gel dianalisis melalui masa elusi, dan separuh - hormon dalam peredaran darah dan pengedaran organ sasaran diramalkan dengan menggabungkan model matematik.
Kes Permohonan Sephadex G-75 dalam Penyelidikan Isyarat Sel
Penyelidikan mengenai transduksi isyarat sel darah merah dan fungsi integrin
Integrin reseptor platelet IIB 3 adalah glikoprotein yang paling banyak pada permukaan membran platelet dan penting untuk pembentukan hemostasis dan thrombus. Kaji penggunaan Sephadex G-75 untuk mensimulasikan interaksi antara platelet dan kolagen subendothelial:
Model Pengaktifan Integrin: Integrin yang disucikan IIB 3 telah ditetapkan pada permukaan zarah gel, dan fibrinogen larut (FG) ditambah sebagai ligan. Kinetik mengikat dikesan oleh resonans plasmon permukaan (SPR). Telah didapati bahawa pertalian integrin ke FG selepas pengaktifan meningkat dengan ketara (KD dikurangkan dari μ m hingga nm).
Pemeriksaan ubat antiplatelet: Pramuat integrin kompleks FG dalam lajur gel, tambah ubat antiplatelet kepekatan yang berbeza (seperti tirofiban), mengira kadar perencatan ubat -ubatan pada aktiviti integrin oleh anjakan puncak elusi, dan menyediakan platform penyaringan {0}
Peraturan jalur isyarat berkaitan tumor
Sel -sel tumor menggalakkan percambahan dan metastasis melalui pengaktifan tidak normal laluan isyarat seperti MAPK dan PI3K/Akt. Sephadex G-75 boleh digunakan untuk mengasingkan dan membersihkan protein utama dalam laluan isyarat:
Penyelidikan laluan isyarat EGFR: Protein EGFR disucikan oleh penapisan gel Sephadex G-75, dan status fosforilasinya dianalisis oleh spektrometri massa. Telah didapati bahawa tahap fosforilasi Y1068 dan Y1086 tapak EGFR meningkat dengan ketara selepas rangsangan EGF, yang mengaktifkan isyarat Hiliran ERK1/2 dan Akt.
Analisis mekanisme rintangan dadah: Dalam ubat-ubatan kanser gastrik yang tahan dadah - (SGC7901/VCR), protein UHRF1 diasingkan dan disucikan oleh Sephadex G-75, dan didapati bahawa overexphasinya boleh menghalang pengaktifan protein (seperti ini. kali).
Peraturan isyarat sel imun dan polysaccharide
Polysaccharides alga merah (BFP) meningkatkan tindak balas imun dengan mengaktifkan NF - κ B dan laluan isyarat MAPK dalam makrofaj. Penyelidikan mengenai pemisahan dan pemurnian BFP dan komponennya (F1, F2, F3) menggunakan Sephadex G-75:
Polysaccharide component analysis: BFP, F1, F2 and F3 with purity>95% diperolehi oleh penapisan gel Sephadex G-75 yang digabungkan dengan kromatografi pertukaran DEAE selulosa 52 ion, dan berat molekul mereka adalah 120 kDa, 85 kDa, 60 kDa dan 45 kDa.
Pengaktifan jalur isyarat: Dalam model makrofag RAW264.7, BFP dan komponennya dapat mendorong rembesan NO dan TNF -, dan mekanismenya melibatkan translocation nuklear NF {{2} Komponen yang disucikan yang dipisahkan oleh Sephadex G - 75 menunjukkan bahawa F1 mempunyai kesan pengaktifan terkuat pada laluan NF - κ B dan MAPK (meningkatkan pengeluaran NO sebanyak 2.5 kali dan TNF - rembesan sebanyak 3 kali).
Cool tags: Sephadex G75 CAS 37224-29-6, Pembekal, Pengilang, Kilang, Borong, Beli, Harga, Pukal, Dijual