Tetramethylbenzidine CAS 54827-17-7

Dalam bidang diagnostik in vitro klinikal, TMB ialah substrat kromogenik teras enzim-ujian imunosorben terpaut (ELISA) dan komponen fungsi teras bagi sebahagian besar kit immunoassay. Di tempat pengesanan serologi penyakit berjangkit, kit ELISA untuk saringan penyakit berjangkit seperti hepatitis BB, antibodi hepatitis C dan antibodi AIDS berdasarkan sistem kromogenik TMB, dengan warna latar belakang yang sangat rendah dan kepekaan pengesanan tinggi, telah menjadi skim teknikal arus perdana untuk pemeriksaan darah berskala besar-di stesen darah domestik.

Data aplikasi stesen darah domestik menunjukkan bahawa had pengesanan minimum antigen permukaan hepatitis BB boleh mencapai 0.1IU/mL dengan kit pemeriksaan darah menggunakan TMB sebagai substrat kromogenik.

Berbanding dengan sistem kromogenik OPD tradisional, kadar diagnosis terlepas negatif palsu dikurangkan sebanyak 90%, menyekat sepenuhnya risiko penularan penyakit berjangkit berkaitan transfusi daripada sumbernya. Dalam pemeriksaan penyakit berjangkit pesakit luar rutin di hospital tertiari, kit ELISA sistem kolorimetrik TMB mengawal perbezaan hasil pengesanan antara kelompok dalam 5%, menggandakan kelajuan pengesanan berbanding kaedah tradisional dan boleh melengkapkan ujian daya-tinggi bagi ribuan sampel setiap hari.

Memenuhi keperluan saringan awal penyakit berjangkit dengan sempurna dalam-populasi berskala besar. Dalam pengesanan klinikal hormon dan penanda tumor, kelebihan sensitiviti tinggi sistem kolorimetrik TMB diserlahkan lagi. Dalam pengesanan penunjuk hormon fungsi tiroid seperti TSH, T3, T4, dsb., julat linear dinamik pembangunan warna TMB adalah tiga kali lebih luas daripada reagen pembangunan warna tradisional, yang boleh merangkumi julat kepekatan penuh dengan tepat daripada individu yang sihat kepada pesakit hipertiroidisme dan hipotiroidisme, mengelakkan penggera palsu yang disebabkan oleh kesan cangkuk dalam sampel kepekatan tinggi.

Dalam pengesanan klinikal penanda tumor, kit ELISA berasaskan TMB boleh mengesan dengan tepat penanda tumor seperti CEA dan AFP dengan kepekatan hanya beberapa ng/mL dalam serum, memberikan hasil kuantitatif yang boleh dipercayai untuk pemeriksaan awal dan pemantauan berulang selepas pembedahan kanser.

Data statistik dari jabatan patologi hospital tertiari di China menunjukkan bahawa kadar pengesanan tumor gastrousus awal menggunakan skema pengesanan gabungan penanda tumor kolorimetrik TMB adalah 25% lebih tinggi daripada kaedah tradisional. Dalam senario diagnosis tambahan pengesanan pantas antigen COVID-19, TMB, sebagai komponen teras pembangunan warna enzimatik selain kaedah emas koloid.

Ia digunakan dalam-sistem pengesanan ELISA yang tinggi untuk antigen COVID-19. Kepekaan pengesanan adalah satu urutan magnitud yang lebih tinggi daripada kaedah emas koloid tradisional, yang boleh mencapai pengesanan positif dalam peringkat viral load yang rendah, dengan banyaknya mengurangkan kadar diagnosis yang tidak dijawab bagi orang yang dijangkiti awal. Dalam sistem sokongan immunoassay chemiluminescence automatik sepenuhnya, TMB, sebagai substrat yang dipertingkatkan untuk chemiluminescence langsung lobak pedas peroksidase (HRP), boleh meningkatkan dengan ketara keamatan dan kestabilan isyarat luminescence, meningkatkan isyarat-ke-nisbah hingar bagi chemiluminescence, dan pengesanan nilai CV sepenuhnya dalam 4 kali ganda pengesanan dalam tempoh 4 kali ganda. -keperluan pengesanan berketepatan tinggi bagi peralatan immunoassay automatik sepenuhnya mewah.

Dalam bidang penyelidikan biologi,tetramethylbenzidineialah substrat kromogenik pilihan untuk antibodi sekunder berlabel HRP dalam eksperimen Western blot dan merupakan salah satu reagen kromogenik yang paling biasa digunakan dalam makmal biologi molekul. Dalam eksperimen Western Blot tradisional, penggunaan sistem kolorimetrik yang dipertingkatkan chemiluminescence TMB boleh mengesan protein sasaran serendah tahap pg.

Berbanding dengan kaedah kolorimetrik DAB tradisional, sensitiviti pengesanan meningkat sebanyak dua urutan magnitud, dan ia boleh mengenal pasti perubahan ekspresi protein laluan isyarat kelimpahan rendah dan faktor transkripsi dalam sel. Data percubaan perbandingan daripada makmal biologi universiti domestik menunjukkan bahawa menggunakan penyelesaian pencahayaan-sensitiviti tinggi TMB yang dioptimumkan, masa pembangunan Western Blot telah dipendekkan daripada 30 minit tradisional kepada kurang daripada 10 saat, dengan jalur latar belakang yang bersih dan tiada kekotoran. Dua jalur protein yang serupa dengan perbezaan berat molekul hanya 1kDa boleh dibezakan dengan jelas, meningkatkan kebolehpercayaan eksperimen imunoblotting protein dengan ketara.

Dalam senario eksperimen imunohistokimia dan imunohistokimia, sistem pewarnaan TMB yang dipertingkatkan boleh menghasilkan produk tidak larut biru yang stabil, mengesan kedudukan ekspresi protein sasaran dengan tepat dalam kepingan tisu dan slaid sel. Berbanding dengan pewarnaan kuning kecoklatan DAB tradisional, produk pewarnaan TMB biru membentuk perbezaan warna lembut dengan nukleus ungu biru yang diwarnakan dengan hematoksilin, tanpa resapan tepi biasa dan latar belakang masalah pewarnaan bukan-spesifik bagi pewarnaan DAB. Dalam eksperimen penyetempatan protein neurotransmitter dalam tisu saraf dan tafsiran ekspresi protein PD-L1 dalam tisu tumor.

Pengiktirafan hasil pewarnaan TMB adalah jauh lebih baik daripada kaedah pewarnaan tradisional, membantu penyelidik memerhati dengan lebih tepat morfologi penyetempatan subselular protein.

Dalam senario penyelidikan asas analisis aktiviti enzim, TMB ialah substrat khusus untuk menentukan aktiviti peroksidase surih. Berdasarkan spektrofotometri kolorimetrik pengoksidaan TMB, aktiviti enzim HRP dengan kepekatan serendah 1ng/mL dalam sampel boleh dikesan dengan tepat. Ia adalah kaedah eksperimen klasik untuk mengkaji peroksidase tumbuhan dan aktiviti enzim antioksidan mikrob. Dalam penyelidikan hadapan bagi-enzimologi molekul tunggal, molekul TMB yang tidak bergerak boleh menghasilkan mendakan warna setempat di bawah pemangkinan molekul enzim HRP tunggal.

Taburan spatial dan kinetik pemangkin bagi molekul enzim tunggal boleh diperhatikan secara langsung melalui mikroskop optik, menyediakan kaedah pemerhatian intuitif untuk penyelidikan asas bagi-enzimologi molekul tunggal. Dalam senario pengesanan hibridisasi asid nukleik, HRP dilabelkan pada probe asid nukleik dan jujukan asid nukleik sasaran dalam sampel dikesan secara kuantitatif oleh keamatan warna TMB. Tanpa memerlukan peralatan pengesanan pendarfluor yang kompleks, pengesanan kualitatif dan kuantitatif asid nukleik kos rendah boleh diselesaikan. Ia telah digunakan secara meluas dalam eksperimen menaip gen dan menyaring komponen yang diubah suai secara genetik di makmal penyelidikan saintifik akar umbi.

Dalam bidang pemantauan alam sekitar,tetramethylbenzidinedigunakan secara meluas sebagai reagen kolorimetrik pengoksidaan yang sangat sensitif untuk pengesanan pantas jumlah surih hidrogen peroksida dan ion logam berat dalam air. Dalam senario ujian keselamatan air minuman, sistem pengesanan kolorimetrik simulasi peroksidase berasaskan TMB boleh mengesan dengan cepat sisa disinfektan hidrogen peroksida dalam air minuman serendah 0.01mg/L, jauh di bawah keperluan had piawaian kebersihan air minuman kebangsaan.

Proses pengesanan tidak memerlukan instrumen yang besar, dan pertimbangan separa kuantitatif boleh diselesaikan dengan memerhati kedalaman biru larutan dengan mata kasar, yang sangat sesuai untuk pemantauan kualiti air kecemasan di lapangan. Dalam senario pengesanan ion logam berat seperti plumbum dan merkuri dalam badan air, peroksidase simulasi emas nano yang difungsikan secara khusus boleh bertindak balas kepada ion logam berat. Melalui perubahan keamatan warna TMB, pengesanan visualisasi terpilih yang tinggi bagi ion logam berat boleh dicapai, dengan had pengesanan sehingga 1nM dan kos pengesanan hanya satu peratus daripada spektroskopi penyerapan atom tradisional.

Ia telah menunjukkan nilai aplikasi yang sangat tinggi dalam saringan keselamatan air minuman luar bandar dan pemantauan pantas tapak pembuangan air sisa industri.

Dalam bidang ujian keselamatan makanan, TMB ialah komponen pembangunan warna teras pelbagai jalur ujian pengesanan pantas. Dalam senario pengesanan perencatan enzim sisa racun perosak dalam makanan, racun perosak organofosforus dan karbamat menghalang aktiviti asetilkolinesterase. Melalui gandingan perubahan warna TMB yang dimangkin peroksidase,-penyaringan di tapak sisa racun perosak dalam sayur-sayuran boleh diselesaikan dengan cepat dalam masa 10 minit.

Kepekaan pengesanan memenuhi keperluan had piawaian keselamatan makanan negara dan merupakan kaedah pengesanan pantas yang paling biasa digunakan untuk sisa racun perosak dalam pasaran pertanian domestik dan jabatan kawal selia akar umbi. Dalam pengesanan imunokromatografi emas koloid bagi bahan pencemar molekul kecil seperti clenbuterol dan melamin yang ditambahkan secara haram dalam makanan, enzim yang memangkinkan teknologi kolorimetrik dipertingkatkan berdasarkan TMB boleh meningkatkan sensitiviti pengesanan jalur ujian emas koloid tradisional sebanyak lebih daripada 10 kali ganda, mencapai pengesanan tepat kepekatan rendah aditif haram dan pengesanan negatif palsu yang sangat tinggi.

Dalam senario pengesanan pesat pencemaran mikrob dalam makanan, penggunaan hidrogen peroksida yang dijana semasa metabolisme mikrob, digabungkan dengan tindak balas warna TMB, dengan cepat dapat menyelesaikan pemeriksaan separuh kuantitatif jumlah bilangan bakteria dalam makanan dalam masa 2 jam. Berbanding dengan kaedah kultur plat 48 jam tradisional, masa pengesanan sangat dipendekkan, yang sangat sesuai untuk barisan pengeluaran makanan yang cepat dalam pengeluaran makanan. Dalam pengesanan pantas aflatoksin B1 dalam makanan bijirin dan minyak, sistem pengesanan ELISA berasaskan TMB mempunyai had pengesanan minimum 0.1 μ g/kg, memenuhi sepenuhnya keperluan had ketat aflatoksin dalam makanan negara. Kos pengesanan jauh lebih rendah daripada kaedah pengesanan spektrometri jisim dengan instrumen besar, menjadikannya sesuai untuk tinjauan keselamatan makanan bijirin dan minyak berskala besar-.