Sephadex LH-20 CAS 9041-37-6

Bentuk dan Struktur:
Gel Sephadex ialah gel manik dengan struktur rangkaian tiga-dimensi. Struktur ini membolehkan gel dextran membengkak sepenuhnya dalam larutan air dan elektrolit, membentuk lapisan gel yang stabil. Kebutiran gel dextran juga berbeza. Gel dextran ultrafine digunakan untuk kromatografi lajur dan kromatografi lapisan-nipis yang memerlukan peleraian sangat tinggi, manakala gel kasar dan sederhana digunakan untuk kromatografi persediaan, yang boleh mencapai kadar aliran tinggi di bawah tekanan rendah.

Keupayaan bengkak:
Gel dextran mengandungi sejumlah besar kumpulan hidroksil, yang membolehkan gel membengkak sepenuhnya dalam larutan air dan elektrolit. Tahap bengkak ialah sifat fizikal penting gel dextran, yang menentukan kesan pemisahan gel dan ketumpatan pembungkusan lajur kromatografi. G-gel dextran jenis mempunyai darjah pemautan silang yang berbeza, jadi darjah pembengkakan dan julat pemisahannya berbeza. Tahap bengkak pada dasarnya tidak terjejas oleh kehadiran garam dan detergen, yang membolehkan gel dextran mengekalkan kesan pemisahan yang stabil di bawah pelbagai keadaan eksperimen.

Kestabilan:

Saiz zarah dan julat pemisahan:
Kebutiran gel dextran mempunyai pengaruh penting pada kesan pemisahannya. Gel dengan saiz zarah yang berbeza sesuai untuk keperluan pemisahan yang berbeza. Gel dekstran ultra halus sesuai untuk kromatografi lajur dan kromatografi lapisan nipis yang memerlukan resolusi sangat tinggi, manakala gel kasar dan sederhana sesuai untuk kromatografi persediaan. Di samping itu, julat pemisahan gel dextran juga berbeza dengan tahap silang silangnya. Sebagai contoh, julat pemisahan gel dextran G-10 adalah kurang daripada 700, yang sesuai untuk pengasingan bahan molekul kecil; Gel sephadex G-200 mempunyai julat pemisahan 5000-600000, yang sesuai untuk pengasingan dan penulenan bahan makromolekul.

Pemasangan lajur dan baki:
Gel dextran perlu dirawat sebelum digunakan, termasuk pembengkakan dan pemuatan lajur. Bengkak adalah untuk merendam gel kering dalam air suling selama sekurang-kurangnya 24 jam, dan terus kacau untuk memastikan bengkak penuh gel. Apabila memasang lajur, letakkan gel bengkak ke dalam lajur pada satu masa mengikut keperluan pemasangan lajur, beri perhatian untuk mengekalkan pemasangan lajur basah, dan elakkan gelembung atau kerosakan dalam lajur. Selepas pemasangan lajur, rawatan keseimbangan diperlukan, yang melibatkan penggunaan larutan penimbal dari lajur atas untuk mengimbangi sekurang-kurangnya 3-5 isipadu lajur lajur kromatografi sehingga garis dasar perakam menjadi stabil. Tujuan keseimbangan adalah untuk menjadikan lajur gel mencapai keadaan stabil dan memastikan kesan pemisahan.

Kesan pemisahan dan saiz sampel:
Kesan pemisahan gel dextran berkait rapat dengan jumlah pemuatannya. Saiz sampel yang berlebihan atau tidak mencukupi boleh menjejaskan kecekapan pengasingan. Secara umumnya, jumlah pemuatan sampel penapisan gel secara amnya tidak melebihi 5% daripada isipadu katil lajur. Untuk pemuatan sampel awal, adalah disyorkan untuk mengawal volum katil pada 1-2%, yang boleh diselaraskan bergantung pada situasi pemisahan. Isipadu sampel semasa penyahgaraman boleh mencapai 20% daripada isipadu dasar lajur. Selain itu, pemilihan ketinggian lajur juga berkaitan dengan keperluan pemisahan. Jika ketinggian lajur terlalu tinggi, lapisan gel akan menyebabkan tekanan belakang yang lebih besar dan menjejaskan kesan pemisahan. Oleh itu, apabila memilih ketinggian lajur, ia harus ditentukan berdasarkan berat molekul bahan yang diasingkan dan keperluan pengasingan.

Kaedah elusi dan rawatan penjanaan semula:
Terdapat banyak kaedah elusi untuk gel dextran, termasuk elusi bebas air garam, elusi penimbal dan elusi kecerunan. Elusi bebas garam sesuai untuk pengasingan bahan molekul kecil; Elusi penimbal sesuai untuk pengasingan dan penulenan bahan molekul besar. Elusi kecerunan ialah proses menambahkan bahan kecerunan seperti NaCl ke penimbal lajur atas, dan mengasingkan bahan dengan berat molekul yang berbeza dengan menukar kekuatan ion eluen. Selepas tempoh penggunaan, gel dextran perlu dijana semula untuk mengeluarkan protein sisa yang termendak dan degil dalam katil lajur. Kaedah rawatan penjanaan semula termasuk siram terbalik berulang dengan air dan keseimbangan dengan larutan penimbal. Untuk-gel yang dipelihara jangka panjang, basuh, dehidrasi dan pengeringan juga diperlukan.

Tempoh sah dan syarat penyimpanan:
Tempoh sah gel dextran berbeza dengan model dan keadaan penyimpanannya. Secara umumnya, tempoh sah gel dextran berbeza dari beberapa bulan hingga satu tahun. Dalam tempoh sah, gel hendaklah disimpan di tempat yang kering, sejuk dan gelap. Gel yang tidak digunakan boleh disimpan pada suhu bilik; Selepas digunakan, gel perlu dirawat dengan betul sebelum disimpan. Untuk gel yang disimpan untuk masa yang singkat, ia boleh dibasuh bersih dan ditapis kering, ditambah dengan jumlah pengawet yang sesuai (seperti 0.02% natrium azida) atau direndam dalam 20% etanol untuk mengawal pertumbuhan mikrob. Untuk-gel terpelihara jangka panjang, ia perlu dikeluarkan dari lajur, dibasuh, dihidratkan, dikeringkan dan dibotolkan untuk penyimpanan.