Retatrutide(pautan:https://www.bloomtechz.com/synthetic-chemical/peptide/retatrutide-powder-cas-2381089-83-2.html) ialah agonis polipeptida GLP-1R/GIPR/GCGR yang disintesis secara kimia, yang bertujuan untuk rawatan diabetes jenis 2 dewasa, pengurusan berat badan dan hati berlemak bukan alkohol/steatohepatitis bukan alkohol. Petunjuk untuk diabetes jenis 2 dewasa produk ini telah diluluskan untuk kegunaan klinikal pada 29 Ogos 2023. Selain itu, permohonan pendaftaran klinikal tanda-tanda hati berlemak bukan alkohol/steatohepatitis bukan alkohol sedang dalam peringkat semakan akhir. Terdapat lapan agonis GLP-1R/GIPR/GCGR dalam pembangunan di dunia, yang mana, Retatrutide Rita telah mencapai kemajuan terpantas dan melancarkan percubaan klinikal fasa ketiga pada Jun tahun ini. Pada bulan yang sama, Rita mengumumkan bahawa data penyelidikan fasa kedua retatrutide dikeluarkan pada mesyuarat tahunan ADA, menunjukkan bahawa pada 24 minggu, retatrutide (1 mg, 4 mg, 8 mg atau 12 mg) mencapai titik akhir keberkesanan utama. penilaian untuk peserta obes atau berat badan berlebihan tanpa diabetes, dengan purata penurunan berat badan sebanyak 17.5%. Di antara titik akhir sekunder, purata penurunan berat badan sebanyak 24.2% telah dicapai pada akhir 48 minggu rawatan. Kami juga telah mensintesis peptida dalam makmal berdasarkan kaedah yang diterbitkan. Kaedah sintesis khusus akan diterangkan secara ringkas, dan langkah khusus boleh dihantar kepada kami melalui e-mel.
Kaedah 1:
Langkah terperinci untuk mensintesis Retarutide menggunakan sintesis keadaan pepejal di makmal adalah seperti berikut:
Sediakan reagen dan instrumen yang diperlukan: termasuk asid amino, diklorometana, kalium karbonat, gel silika etoksilasi, asetonitril, piridin, N-methylmorpholine, sumber diisopropylethyl chloride, asid trifluoroacetic, DIPEA, asid amino terlindung Boc dan reagen lain, serta stirrer magnetik , penyejat berputar dan instrumen lain.
(1) Sintesis asid amino terlindung Boc: Larutkan asid amino yang diperlukan dalam diklorometana, tambah serbuk kalium karbonat, kacau rata, tambah gel silika tetoksilasi, teruskan kacau, dan kemudian tambah piridin dan N-metilmorfolin untuk mendapatkan asid amino yang dilindungi Boc.
(2) Sintesis fasa pepejal: Campurkan asetonitril, sumber diisopropiletil klorida, dan asid trifluoroasettik bersama-sama, kacau rata, tambah asid amino terlindung Boc yang disediakan, dan teruskan kacau untuk mendapatkan produk sintesis fasa pepejal.
(3) Kumpulan deprotection: Larutkan sintesis fasa pepejal dalam diklorometana, tambah asid trifluoroacetic, kacau rata, dan kemudian tambah DIPEA. Teruskan mengacau untuk mendapatkan sintesis fasa pepejal yang tidak dilindungi.
(4) Pemurnian: Larutkan sintesis fasa pepejal yang tidak dilindungi dalam air, laraskan pH kepada sekitar 9.0 dengan larutan natrium hidroksida, kemudian laraskan pH kepada sekitar 5.0 dengan asid asetik, dan akhirnya mendakan produk tulen dengan eter.
Kaedah 2:
Langkah terperinci untuk mensintesis Retarutide menggunakan sintesis fasa cecair di makmal adalah seperti berikut:
Sediakan reagen dan instrumen yang diperlukan: termasuk arginin, glisin, anhidrida asetik, trietilamin, kalium karbonat, diklorometana, metanol, piridin, N-metilmorfolin, anhidrida asetik, natrium asetat dan reagen lain, serta instrumen seperti pengacau, corong pemisah, pam vakum, ketuhar, dan lajur kromatografi.
(1) Larutkan arginin dan glisin dalam jumlah diklorometana yang sesuai, tambahkan jumlah anhidrida asetik dan trietilamin yang sesuai, dan kacau rata di bawah pengacau.
(2) Pindahkan campuran terlarut ke dalam ketuhar dan panaskan pada 80 darjah C selama 1 jam untuk asetilasi sisa asid amino.
(3) Meneutralkan larutan yang bertindak balas dengan serbuk kalium karbonat untuk meneutralkan asid asetik dalam larutan untuk menghasilkan natrium asetat, dan kemudian mengekstrak peptida yang dihasilkan dengan diklorometana.
(4) Basuh larutan peptida yang diekstrak dengan metanol dan penapis dengan pam vakum untuk mendapatkan peptida mentah.
(5) Larutkan peptida mentah dalam jumlah piridin dan N-methylmorpholine yang sesuai, tambah jumlah anhidrida asetik dan natrium asetat yang sesuai, dan kacau rata di bawah pengacau.
(5) Tapis larutan yang bertindak balas dengan pam vakum, basuh kek penapis dengan metanol, dan kemudian tapis dengan pam vakum untuk mendapatkan Restarutide akhir.
Kaedah 3:
Langkah terperinci untuk mensintesis Retarutide menggunakan kaedah kimia di makmal adalah seperti berikut:
Sediakan reagen dan instrumen yang diperlukan: termasuk arginin, glisin, anhidrida asetik, trietilamin, kalium karbonat, diklorometana, metanol, piridin, N-metilmorfolin, anhidrida asetik, natrium asetat dan reagen lain, serta instrumen seperti pengacau, corong pemisah, pam vakum, ketuhar, dan lajur kromatografi.
(1) Larutkan arginin dan glisin dalam jumlah diklorometana yang sesuai, tambahkan jumlah anhidrida asetik dan trietilamin yang sesuai, dan kacau rata di bawah pengacau.
(2) Pindahkan campuran terlarut ke dalam ketuhar dan panaskan pada 80 darjah C selama 1 jam untuk asetilasi sisa asid amino.
(3) Meneutralkan larutan yang bertindak balas dengan serbuk kalium karbonat untuk meneutralkan asid asetik dalam larutan untuk menghasilkan natrium asetat, dan kemudian mengekstrak peptida yang dihasilkan dengan diklorometana.
(4) Basuh larutan peptida yang diekstrak dengan metanol dan penapis dengan pam vakum untuk mendapatkan peptida mentah.
(5) Larutkan peptida mentah dalam jumlah piridin dan N-methylmorpholine yang sesuai, tambah jumlah anhidrida asetik dan natrium asetat yang sesuai, dan kacau rata di bawah pengacau.
(6) Tapis larutan yang bertindak balas dengan pam vakum, basuh kek penapis dengan metanol, dan kemudian tapis dengan pam vakum untuk mendapatkan Restarutide akhir.
Tindak balas sintesis organik berganda diperlukan untuk mendapatkan molekul sasaran. Di samping itu, kaedah ini menggunakan pelbagai reagen organik dan keadaan operasi yang kompleks, jadi sintesis kimia Rotarutide dalam makmal biasanya tidak sesuai untuk pengeluaran berskala besar atau aplikasi perindustrian. Untuk pengeluaran berskala besar atau aplikasi perindustrian, kaedah yang lebih biasa digunakan ialah menyediakan Rotarutide melalui kaedah sintesis seperti biosintesis atau sintesis fasa cecair, yang agak kecil dalam skala makmal, agak mudah dalam operasi, dan sesuai untuk menyediakan kuantiti produk yang kecil. . Retarutide yang diperolehi melalui kaedah ini adalah serupa atau serupa dalam struktur dan aktiviti biologi dengan Retarutide yang disintesis melalui kaedah kimia, tetapi mempunyai kelebihan hasil yang lebih tinggi dan penyediaan yang lebih mudah. Pada masa yang sama, mereka juga mempunyai potensi perindustrian yang lebih baik dan prospek aplikasi yang lebih luas.
Kaedah 4:
Langkah terperinci untuk mensintesis Retarutide menggunakan kaedah biologi di makmal adalah seperti berikut:
Penyediaan gen dan reagen yang diperlukan: Dapatkan plasmid yang mengandungi gen Retatrutide daripada perpustakaan gen, ubah plasmid dengan sel penerima (seperti Escherichia coli), dan dapatkan bakteria kejuruteraan yang mengandungi gen Retatrutide.
(1) Menanam bakteria kejuruteraan: Di bawah keadaan suhu, pH dan kepekatan ion yang sesuai, gunakan medium kultur untuk memupuk bakteria kejuruteraan, membolehkannya membiak dalam kuantiti yang banyak.
(2) Pengekstrakan Retarutide: Bakteria kejuruteraan yang ditanam dihancurkan menggunakan penghancur, dan serpihan sel diasingkan daripada Retarutide menggunakan kaedah seperti ultrafiltrasi dan pemendapan untuk mendapatkan produk mentah.
(3) Pemurnian Retarutide: Retarutide mentah ditulenkan menggunakan teknologi kromatografi untuk mendapatkan Retarutide ketulenan tinggi.
Pengesanan dan pengecaman Rotarutide: Gunakan kromatografi cecair berprestasi tinggi, spektrometri jisim, resonans magnet nuklear dan teknik lain untuk mengesan dan mengenal pasti struktur Rotarutide yang telah dimurnikan.
Persamaan tindak balas kimia untuk sintesis biologi Retarutide dalam makmal terutamanya melibatkan tindak balas kimia semasa proses ekspresi gen, termasuk dua langkah: transkripsi dan terjemahan.
Transkripsi: DNA untai ganda terbuka, menggunakan satu helai sebagai templat untuk mensintesis helai RNA, yang memerlukan penglibatan polimerase RNA. Persamaan tindak balas adalah seperti berikut:
DNA untai ganda: DNApol → mRNA+DNApol
Terjemahan: Ribosom mengikat kepada mRNA untuk mensintesis rantai peptida, satu proses yang memerlukan penyertaan asid amino dan tenaga. Persamaan tindak balas adalah seperti berikut:
Ribosom+mRNA → Rantaian peptida+GDP+Pi+H2O
Rantaian peptida+ATP → Rantaian peptida+AMP+PPi
Antaranya, DNApol mewakili polimerase DNA; MRNA mewakili RNA messenger; Ribosom mewakili ribosom; Rantai peptida mewakili rantai polipeptida; KDNK mewakili guanosin difosfat; Pi mewakili asid fosforik bukan organik; H2O mewakili air; ATP mewakili adenosin trifosfat; AMP mewakili adenosin monofosfat; PPi mewakili pirofosfat bukan organik. Tindak balas ini menjana rantai peptida yang diperlukan untuk sintesis Retarutide, yang kemudiannya diproses dan diubah suai pada peringkat seterusnya untuk mendapatkan Retarutide.
Di atas adalah kaedah biasa untuk sintesis Rotarutide di makmal, masing-masing dengan kelebihan, keburukan, dan skop penggunaan yang berbeza. Makmal biasanya menggunakan kaedah sintesis fasa cecair dan sintesis fasa pepejal untuk pengeluaran berskala kecil untuk kegunaan penyelidikan dan eksperimen; Pengeluaran perindustrian, sebaliknya, mengamalkan gabungan biosintesis dan pengeluaran fasa cecair/pepejal untuk pengeluaran berskala besar bagi memenuhi permintaan pasaran. Perlu diingatkan bahawa kaedah ini memerlukan pengoptimuman keadaan yang ketat dan kawalan proses untuk memastikan kualiti dan ketulenan produk akhir.