, formula molekul C284H432N84OAprotinin78R2S7, CAS 9087-70-1, Ia adalah perencat protease yang boleh menghalang trypsin dan chymotrypsin, menghalang pengaktifan proteasom aktif lain dalam pankreas dan pengaktifan sendiri trypsinogen. Digunakan secara klinikal untuk pencegahan dan rawatan pankreatitis akut, pendarahan yang disebabkan oleh fibrinolisis, dan pembekuan intravaskular tersebar. Ia juga boleh digunakan untuk rawatan anti renjatan. Perencat protease ialah bahan yang boleh mengikat enzim dan mengurangkan kadar degradasi substrat. Perencat protease dengan sifat protein terdapat secara meluas, dan dua jenis perencat protease dengan sifat protein telah diasingkan daripada kacang soya: perencat Kuniz trypsin dan perencat Baumann Bellck. Yang pertama mempunyai berat molekul 20-25 ku, manakala yang kedua mempunyai berat molekul 8 ku.
|
|
|
Rekombinanaprotinin(RTI16) boleh menghalang kininase dan trypsin, dan merupakan perencat protease serine bukan spesifik semulajadi. Ia adalah protein asas rantai tunggal yang terdiri daripada 58 sisa asid amino, dengan 3 ikatan disulfida bersilang dalam rantai. Untuk masa yang lama, aprotinn telah digunakan untuk rawatan pankreatitis akut. Selepas 1990-an, aprotinn rekombinan mula digunakan dalam pembedahan kardiotoraks untuk melindungi platelet, mengurangkan pendarahan dan eksudasi, dan untuk rawatan klinikal pesakit yang mengalami gangguan pembekuan. Oleh itu, saiz pasaran aprotinn telah berkembang pesat dan menjadi salah satu ubat biokimia yang penting.
sintesis
Pada masa ini, sediaan aprotin rekombinan yang tersedia secara komersil adalah terutamanya ekstrak daripada organ seperti paru-paru lembu, yang mempunyai proses yang kompleks dan kos yang tinggi. Oleh itu, adalah sangat penting untuk meneroka penghasilan aprotin rekombinan menggunakan kaedah kejuruteraan genetik.
Apabila menggunakan sistem ekspresi rembesan, pengeluaran aprotin secara amnya rendah, dan aktiviti produk yang dihasilkan juga rendah. Melalui ekspresi gabungan, ia dijangka dapat meningkatkan tahap ekspresi aprotin rekombinan. Satu plasmid ekspresi aprotinn rekombinan pGrxA BPTI telah dibina untuk tujuan ini, dan tapak pengecaman untuk FXa telah direka bentuk antara pasangan gabungan dan aprotinn rekombinan. Selepas diekspresikan dalam bentuk badan inklusi, pasangan gabungan telah disucikan dan dilipat semula dengan penapisan gel. Rakan gabungan telah dikeluarkan oleh FXa untuk mendapatkan protein dengan aktiviti yang sama seperti produk semula jadi. Melalui pengoptimuman keadaan ekspresi, hasil telah meningkat dengan ketara berbanding dengan sistem ekspresi sebelumnya.
Inokulasi bakteria tiub gliserol pada plat agar LB/AMP, kultur pada 37 darjah selama 20 jam, kikis koloni dan inokulasi ke dalam 5 mL medium cecair LB/AMP pada 37 darjah , 200 r/min, dan biakan semalaman. Inokulum 5% daripada inokulum ke dalam 100 mL medium buburan jagung, kultur pada 37 darjah dan 220 r/min pada shaker, induksi selama 7 jam, dan kemudian sentrifuge (8000 r/min, 5 min, 4 darjah ) untuk mengumpul sel bakteria. Timbang berat basah sel bakteria dan kesan ekspresinya sebanyak 15% SDS-PAGE.
Menggunakan tangki penapaian Biostat 30 L Jerman, pada 37 darjah , dengan oksigen terlarut dikawal pada 20%, pH 7.0. Menggunakan tangki penapaian untuk mengekspresikan protein gabungan, 260 g sel bakteria basah diperoleh daripada 16 L sup penapaian, kira-kira 16 g/L; Tahap ekspresi adalah kira-kira 45%,
Selepas penanaman selesai, kumpulkan sel bakteria, tambah 1 g sel bakteria kepada 10 mL larutan A (50 mmol/L Tris HCl, pH 8.0, 1 mmol/L EDTA), gantungkannya dengan teliti, sonicate sel dalam mandi ais, bekerja selama 30 saat, selang selama 10 saat, kuasa 400 W, 30 kitaran. Pindahkan cecair ke dalam tiub emparan, emparan pada 4 darjah dan 8000 r/min selama 15 minit, dan mendakan ialah badan kemasukan mentah.
Basuh badan kemasukan mentah dengan larutan B (50 mmol/L Tris HCl, pH 8.0, 1 mmol/L EDTA, 1% Triton-X100) dua kali, setiap kali selama 0.5 jam, sentrifuge untuk mengeluarkan supernatan, dan mendapatkan badan kemasukan yang agak tulen. Tambah 1 g badan rangkuman kepada 5 mL larutan C (50 mmol/L Tris HCl, pH 8.0, 8 mol/L urea, 1 mmol/L EDTA, 5 mmol/L DTT), eramkan semalaman pada 4 darjah , denatur dan larutkan, sentrifuge pada 12000 r/min selama 15 minit, dan kumpulkan supernatan untuk mendapatkan badan kemasukan larutan pelarutan. Dapatkan aprotinn rekombinan.
Kesan farmakologi:
Aprotininmenghalang trypsin manusia, enzim fibrinolitik, plasma, dan angiotensin tisu melalui kompleks perencat enzim boleh balik yang terbentuk dalam nisbah kimia tertentu. Protease dengan aktiviti serin memainkan peranan utama dalam sistem kininogen kinin vasopressin, sistem pelengkap, dan sistem pembekuan, di mana plasmin dan plasma vasopressin memainkan peranan penting.
Aprotinn memberikan kesan perencatannya dengan membentuk kompleks protease aprotinn melalui bahagian aktif serin pada enzim. Walau bagaimanapun, apabila digabungkan dengan protease yang berbeza, ia mempamerkan pemalar disosiasi yang berbeza. Ikatan dengan trypsin adalah yang paling kuat (Ki=0.06nmoN), iaitu salah satu pemalar paling rendah yang dilaporkan dalam interaksi protein-protein (Laydunski et al. 1974). Ikatan dengan enzim fibrinolitik manusia tidak begitu kuat. Disebabkan oleh nilai K yang tinggi bagi kompleks perencat enzim (Ki=1 nmoN), ia mungkin boleh diterbalikkan (Wimann, 1980), dan kompleks yang mengikat kepada angiotensin plasma manusia agak lemah (Ki=30 nmol/l), tetapi masih dalam julat terapeutik aprotinn (Nakahara, 1983).
Aprotinn bukan sahaja mengikat molekul enzim bebas, tetapi juga kepada enzim yang telah terikat kepada komponen ketiga (jika pusat aktif enzim masih mempunyai keupayaan mengikat). Oleh itu, aprotinn menghalang enzim fibrinolitik bebas dan juga boleh menghalang kompleks rantai kinase fibrinolysin perantaraan yang terbentuk semasa terapi trombolytik dengan kinase rantai (Wimann, 1980).
Kesan anti fibrinolitik aprotinn adalah berdasarkan perencatan plasmin yang diaktifkan oleh hidrolisis protein. Tidak seperti pelarut anti fibrinolitik sintetik, disebabkan perencatan langsung plasmin yang terlalu aktif, aprotinn bukan sahaja melindungi substrat langsung (fibrin) daripada degradasi oleh plasmin, tetapi juga melindungi fibrinogen, faktor V dan VIII dalam plasma, dan alpha 2-globulin dalam serum.
Dalam eksperimen kejutan akibat endotoksin dan kejutan hipovolemik, Trasylol boleh menghalang pengaktifan kininogen dengan ketara. (Massion et a1．1972).
Trasylol boleh menghalang atau melambatkan perkembangan edema interstisial pulmonari (paru-paru kejutan). Kesan perencatannya adalah bergantung kepada dos dan bergantung pada masa (Lorthioir et al., 1973).
Semasa kejutan, pankreas iskemia boleh menghasilkan bahan peptida yang sangat toksik, iaitu faktor perencatan miokardium (MDF). Faktor ini berkait rapat dengan kematian akibat terkejut. MDF boleh dikesan dalam plasma tikus, anjing, monyet, dan manusia dengan renjatan hemoragik, septik, kardiogenik dan renjatan terbakar. MDF boleh menyebabkan penurunan kontraksi miokardium dalam semua kes pendarahan, dan pada masa yang sama, ia menyebabkan penguncupan saluran rintangan viseral, yang membawa kepada iskemia tempatan dan pengeluaran lebih banyak MDF. Selain itu, disebabkan oleh kerosakan toksik yang disebabkan oleh sistem retikuloendothelial, pelepasannya dalam aliran darah ditangguhkan. Trasylol boleh menghalang pengeluaran MDF (Lefer 1984).
Farmakodinamik:
Selepas suntikan intravena Trasylol, bentuk asalaprotininmengedar dengan cepat ke seluruh fasa ekstraselular, membawa kepada penurunan pesat dalam kepekatan ubat darah (separuh hayat kira-kira 23 minit).
Setelah pengedaran ubat mencapai keseimbangan, separuh hayat penurunan kepekatan ubat darah 1-4 jam selepas suntikan ialah kira-kira 150 minit. Isipadu pengedaran utama (ruang tengah) adalah kira-kira 30% hingga 50% daripada cecair badan.
Selepas 24 jam infusi pada dos 250000 KIU/j, pesakit mencapai kepekatan plasma tetap 40-50 KIU/ml. Kepekatan ini bersamaan dengan kira-kira 1 μ mol/l dan sama dengan kepekatan normal alfa 2-antifibrinolysin dalam plasma.
Aprotinn terkumpul di dalam buah pinggang dan pada tahap yang lebih rendah dalam tisu rawan. Pengayaan dalam buah pinggang adalah disebabkan oleh pengikatan aprotinn pada tepi berus sel epitelium tiub proksimal, dan aprotinn juga diperkaya dalam lisosom fagositik. Disebabkan oleh pertalian aprotin beralkali untuk proteoglikan berasid, ia terkumpul dalam tisu rawan (Kaller, 1968).
Pengayaan aprotinn dalam lisosom fagositik bergantung pada mekanisme pengangkutan aktif sel epitelium tubular renal, dan oleh itu juga pada fungsi sel utuh.
Kepekatan dalam paru-paru, limpa, dan pankreas adalah serupa dengan serum. Kepekatannya paling rendah dalam otak, otot, perut, dan usus.
Trasylol sebenarnya tidak memasuki cecair serebrospinal (CSF). Trasylol tidak dikesan dalam cecair serebrospinal anjing, guinea pig, sukarelawan yang sihat, atau pesakit dengan atau tanpa jangkitan saraf.
Hanya jumlah Trasylol yang sangat terhad boleh melalui halangan plasenta. Selepas suntikan intravena sebelum bersalin, kepekatan darah bayi baru lahir adalah 1/10 daripada kepekatan darah ibu, dan penyelidik lain tidak menemui aprotin dalam darah janin ibu yang telah menerima infusi Trasylol. Plasenta mungkin tidak telap sepenuhnya kepada Trasylol, tetapi laluannya jelas merupakan proses yang sangat perlahan.
Kajian in vitro telah menunjukkan bahawa
Aprotinin, sebagai sebatian molekul kecil yang menentang fibrinolisis, mempamerkan sifat perencatan enzim yang ketara dan spesifik. Ia bukan sahaja berkesan menghalang aktiviti trypsin, tetapi juga bertindak secara meluas pada enzim proteolitik lain yang berkaitan, sekali gus memainkan peranan penting dalam eksperimen biologi sel. Terutamanya semasa lisis dan homogenisasi sel dan tisu, Aprotinn boleh berfungsi sebagai perencat protease yang cekap, dengan berkesan menghalang degradasi protein sasaran secara tidak sengaja, yang penting untuk mengekalkan integriti dan ketepatan sampel.
Kesan perencatan Aprotinn menunjukkan pergantungan dos yang jelas, iaitu, apabila kepekatannya meningkat, kesan perencatan pada aktiviti fibrinolitik juga meningkat dengan sewajarnya. Ciri ini membolehkan penyelidik mengawal keadaan percubaan dengan lebih tepat untuk mendapatkan keputusan eksperimen yang lebih dipercayai dan boleh dihasilkan semula. Sementara itu, Aprotinn juga boleh memanjangkan masa pembekuan darah, seterusnya mengesahkan peranan pentingnya dalam mekanisme pembekuan. Eksperimen in vitro telah menunjukkan bahawa Aprotinn ialah perencat laluan pembekuan endogen yang berkesan yang boleh mengganggu dan mengawal proses utama dalam proses pembekuan.
Penyelidikan dalam vivo
Aprotini juga telah menunjukkan kesan farmakologinya yang unik. Ia boleh menghalang dengan ketara proses pembubaran bekuan darah secara in vitro, memanjangkan masa pendarahan pemangkasan ekor pada tikus, dan memanjangkan masa pembekuan dalam plasma manusia. Penemuan ini menunjukkan bahawa Aprotinn mungkin mempunyai potensi kesan anti pendarahan dan anti trombotik. Untuk mengesahkan lagi kesan in vivonya, penyelidik menjalankan eksperimen dalam model litar pintas arteriovenous tikus. Keputusan menunjukkan bahawa Aprotnin boleh mengurangkan berat bekuan darah dengan ketara, seterusnya menyokong potensinya sebagai ubat antitrombotik.
Secara ringkasnya, Aprotnin, sebagai sebatian molekul kecil yang menghalang fibrinolisis, telah menunjukkan sifat perencatan enzim yang ketara dan kesan farmakologi kedua-dua in vitro dan in vivo. Aplikasinya dalam eksperimen biologi sel menyediakan penyelidik dengan alat yang berkuasa, manakala penemuannya dalam kajian in vivo memberikan petunjuk dan asas penting untuk perkembangannya sebagai ubat anti pendarahan dan anti trombotik. Pada masa hadapan, dengan penyelidikan lanjut mengenai mekanisme tindakan Arotnin dan ujian klinikal, kami dijangka melihat aplikasinya yang lebih luas dalam bidang perubatan.
Cool tags: aprotinin cas 9087-70-1, pembekal, pengilang, kilang, borong, beli, harga, pukal, untuk dijual